整个PCR工作流程易受引入变量的影响。许多变量无法避免，例如样本来源和逆转录步骤的要求。实验设计也波动较大，可能决定PCR的成败，影响实验的可重复性和灵敏度。实验设计过程遵循以下逻辑流程：第一步是确定靶标的位置。在某些情况下，寡聚核苷酸序列是由特定应用决定，且不可避免，例如SNP检测；另一些情况下，可以使用整个基因，例如拷贝数测定。一旦选择了大概的实验位点，就能确定最合适的引物并确定修饰。进行多重PCR实验时，重点要考虑反应中的寡核苷酸之间可能发生的相互作用，以及靶标的相对丰度。在复杂情况下，例如目的是检测非常低的拷贝数或靶标浓度的微小差异，建议选择并测试几种引物组合，然后结合适合的探针组合。更多内容请到默克生命科学